Résumé

La cataractogenèse dans le diabète sucré est principalement due à la génération de radicaux libres provoquant un stress oxydatif. Les antioxydants sont connus pour retarder la cataractogenèse. Les plantes indigènes sont des sources potentielles d’antioxydants prometteuses.

Objectifs

La présente étude a été réalisée dans des lentilles de chèvre pour explorer le potentiel antioxydant et anticataract local de Syzygium cumini (Jamun) et Aegle marmelos (Bael) et comparer leurs activités.

matériel et méthodes

La «technique de culture d’organes de lentille» a été utilisée en utilisant le «milieu de culture tissulaire 199» (TC 199). Les lentilles ont été divisées en quatre groupes de 30 chacun. Le groupe 1 était «Contrôle normal». Dans les 3 groupes restants, une cataracte diabétique expérimentale a été produite en utilisant du dextrose (110 mM). Groupe 2: «Toxic Control» (lentilles expérimentales de cataracte diabétique non traitées). Groupe 3: Lentilles traitées à l’extrait de graines de S. cumini (0,25%). Groupe 4: Lentilles traitées à l’extrait de feuille d’A. Marmelos (0,25%). Les paramètres biochimiques mesurés dans les homogénats du cristallin comprenaient les protéines totales solubles du cristallin (indice de cataractogenèse), le malondialdéhyde (indice de peroxydation lipidique) et la superoxyde dismutase, la glutathion réductase et la glutathion peroxydase (indices d’activité enzymatique antioxydante). La morphologie du cristallin a été comparée dans tous les groupes.

Résultats

S. cumini et A. marmelos ont montré une activité significativement accrue des trois enzymes antioxydantes, des protéines solubles totales préservées et une diminution du malondialdéhyde (MDA). La morphologie du cristallin a été bien préservée avec ces extraits. L’extrait aqueux de graines de S. cumini a obtenu de meilleurs résultats que A. marmelos.

Conclusion

Dans les lentilles de chèvre avec cataracte diabétique expérimentale induite par le dextrose, S. cumini et A. marmelos ont montré des propriétés antioxydantes et anticataractes et la préservation de la morphologie du cristallin (p <0,0001 à 0,05). S. cumini a montré une meilleure activité anticataracte que A. marmelos.

1. Introduction

La cataracte est la principale cause de cécité dans le monde. Le diabète sucré a été considéré comme un facteur de risque majeur de cataractogenèse. On sait que chez les diabétiques, les cataractes surviennent à un âge comparativement plus précoce et 2 à 5 fois plus fréquemment. Il est rapporté qu’environ 20% des chirurgies de la cataracte sont effectuées uniquement pour les diabétiques [1]. L’opacification du cristallin dans la cataracte en tant que complication du diabète sucré est associée à une augmentation du stress oxydatif et hyperosmolaire.

Les dommages oxydatifs du cristallin ont été liés au développement de la cataracte, et la diminution des activités enzymatiques antioxydantes dans le cristallin cataracte souligne l’importance des enzymes antioxydantes dans la prévention des dommages oxydatifs au cristallin et le développement ultérieur de la cataracte [2]. Une large gamme de médicaments comme les inhibiteurs de l’aldose réductase, les anti-inflammatoires non stéroïdiens (AINS) sont actuellement essayés pour leur activité anticataracte [3].

Les diverses activités des plantes indigènes suscitent un intérêt croissant. De nombreuses plantes indigènes ont été explorées comme sources potentielles d’antioxydants [[4], [5], [6]].

Syzygium cumini (S. cumini) (L.) Skeels (jambolan), appelé «Jambhul» en marathi et «Jamun» en hindi, a été l’une des plantes les plus largement utilisées dans la gestion de diverses maladies. On sait que le système de médecine ayurvédique utilise des graines de jamun dans la gestion du «madhumeha» (diabète sucré) [7]. Les feuilles d’Aegle marmelos (A. marmelos) (Bael) sont appréciées dans l’Ayurveda dans la gestion du diabète sucré, ainsi que de certaines conditions ophtalmiques et inflammatoires. Les effets antioxydants et hypoglycémiants des feuilles d’A. Marmelos ont été étudiés chez des rats diabétiques induits par l’alloxane [8]. S. cumini a été étudié comme ayant une activité antioxydante [9,10]. Des études d’isolement d’extraits de graines de S. cumini ont démontré une activité antioxydante significative sous forme d’acide caféique [11].

La présente étude a été réalisée pour tester spécifiquement les effets antioxydants et anticataract locaux d’extraits de graines de S. cumini et de feuilles d’A. Marmelos sur des modèles expérimentaux de cataracte diabétique induits par le dextrose par une technique de culture d’organes de cristallin dans des lentilles de chèvre isolées. L’étude extrapole également leurs propriétés antioxydantes et anti-cataracte. La morphologie du cristallin, la peroxydation lipidique, la cataractogenèse et l’activité antioxydante spécifique étaient les domaines d’intérêt.

2. Matériel et méthodes

L’étude a été approuvée par le comité d’éthique institutionnel. L’étude a été réalisée sur 120 lentilles de chèvre fraîches isolées. Des globes oculaires de chèvre ont été obtenus de l’abattoir et ont été transportés au laboratoire dans une glacière. Les lentilles ont été retirées des globes oculaires par la méthode d’extraction de lentille intracapsulaire. Les lentilles ont été soigneusement placées sur des boîtes de Pétri stériles avec un filet en nylon de couleur foncée. Les lentilles ont été incubées dans du «Tissue Culture Medium» (TC 199) par «Lens Organ Culture Technique» pendant 72 h [12]. L’étude a été réalisée en 4 groupes de 30 lentilles chacun.

Le groupe 1 a servi de «contrôle normal» (soumis uniquement au TC 199). Le groupe 2 servait de «contrôle toxique» composé de lentilles dans lesquelles une cataracte diabétique expérimentale était produite en utilisant du dextrose 110 mM («contrôle toxique») [13]. Le groupe 3 était constitué de lentilles de chèvre traitées avec un extrait aqueux de graines de S. cumini (Jamun) ainsi que de dextrose et de TC 199. Le groupe 4 était constitué de lentilles de chèvre traitées avec un extrait aqueux de feuilles d’A. Marmelos (Bael), dextrose et TC 199 .

2.1. Préparation d’extraits d’eau végétale

Des poudres sèches de graines de S. cumini (Jamun) et de feuilles de A. marmelos (Bael) ont été prélevées et des extraits d’eau à 25% p / v ont été préparés. Les extraits ont été analysés pour leur pureté et «solides dissous totaux» à l’Indian Drugs Research Association & Laboratory, Pune. La concentration de solution de chaque extrait utilisé pour l’étude était de 0,25%.

2.2. Préparation de l’homogénat de lentille

A la fin de 72 h d’incubation, les lentilles de chaque groupe ont été retirées et un homogénat à 10% de la lentille entière a été préparé dans un tampon phosphate de sodium 0,1 M (pH 7,4). L’homogénat a été centrifugé à 10 000 x g pendant 30 min à -4 ° C dans une centrifugeuse réfrigérée. Le surnageant a été collecté et conservé à -20 ° C jusqu’à une utilisation ultérieure.

2.3. Estimation des paramètres biochimiques

Le surnageant a été soumis à l’estimation des paramètres biochimiques qui comprenaient les protéines solubles totales du cristallin, le malondialdéhyde (MDA), la superoxyde dismutase, la glutathion peroxydase et la glutathion réductase.

La méthode de Lowry a été utilisée pour l’estimation des protéines solubles totales du cristallin et la méthode de Kei Satoh a été utilisée pour estimer la MDA, en tant qu’indice de peroxydation lipidique par quantification des substances réagissant à l’acide thiobarbiturique (TBARS) [14]. L’activité de la superoxyde dismutase a été mesurée par spectrophotométrie en surveillant le taux de réduction du pyrogallol [14]. Des kits Randox ont été utilisés pour l’estimation de la glutathion peroxydase et de la glutathion réductase. Pour l’estimation de la glutathoine peroxydase, les substrats utilisés étaient l’hydroperoxyde et le GSH [15]. La glutathoine réductase a été dosée en mesurant la diminution de l’absorbance à 340 nm en raison de l’oxydation du NADPH en NADP lors de la conversion du GSSG en GSH [16].

2.4. analyses statistiques

La différence en pourcentage a été calculée (augmentation du pourcentage pour l’activité des trois enzymes antioxydantes et diminution du pourcentage pour les quantités de protéines de cristallin solubles totales et de malondialdéhyde), et les valeurs ont été soumises à une analyse statistique.

Les paramètres biochimiques ont été soumis au test «t» de Student pour comparer entre le groupe 1 et le groupe 2 (contrôle normal et contrôle toxique). Pour comparer les paramètres biochimiques entre le groupe 2, le groupe 3 et le groupe 4 (lentilles de cataracte induites par le dextrose, lentilles traitées par S. cumini et lentilles traitées par A. marmelos respectivement), une analyse de variance unidirectionnelle (ANOVA) a été réalisée .

2.5. Morphologie des verres

Pour étudier la morphologie de la lentille, les lentilles ont été placées sur une grille / filet et des changements de transparence de la lentille ont été observés en notant le nombre et les caractéristiques des carrés de la grille / filet vus à travers la lentille. Un trouble ou une opacité généralisés, une intumescence, un gonflement, une perturbation et d’autres changements morphologiques ont également été notés. Les grades des changements de la cataracte ont été classés en fonction de la modification des critères utilisés dans le passé pour évaluer les changements de la cataracte [17]. Ils sont présentés dans le tableau 1.

Tableau 1. Grades des changements de la cataracte.

GradeDescriptionDetails
0No changesVisible grid lines, lens outline and shape preserved
1MildVisible grid lines, minimal lens swelling, lens outline and shape preserved
2ModerateFaintly visible grid lines, lens swelling present
3Moderate to severeAlmost obstructed grid lines, lens outline and shape damaged
4SevereInvisible grid lines, distorted lens shape and outline, mature cataract about to rupture

3. Résultats

3.1. Modifications des lentilles de cataracte induites par le dextrose expérimental

Des changements dans les lentilles de cataracte induites par le dextrose expérimental ont été observés en estimant les changements dans les protéines solubles totales du cristallin, le malondialdéhyde (MDA), la superoxyde dismutase, la glutathion peroxydase et la glutathion réductase etc.

3.1.1. Expression de la peroxydation lipidique

Les valeurs d’expression de la peroxydation lipidique sont listées dans le tableau 2.

Tableau 2. Expression de la peroxydation lipidique et du stress oxydatif dans les lentilles induites par le dextrose.

NoParameterGroup 1 (n = 30)
(“Normal control”)
Group 2 (n = 30)
(“Toxic control”)
(cataract lenses)
1Total soluble lens proteins (mg/dL)
(Mean ± SD)
344 ± 62.56255 ± 62.46 (p < 0.0001)
2Malondialdehyde (MDA) (nmoles/ml)
(Mean ± SD)
9.56 ± 3.4313.45 ± 3.0 (p < 0.0001)
NoAntioxidant EnzymeGroup 1 (n = 30)
(“Normal control”)
(units/mg lens)
(Mean ± SD)
Group 2 (n = 30)
(“Toxic control”)
(cataract lenses) (units/mg lens)
(Mean ± SD)
1Superoxide dismutase0.41 ± 0.140.30 ± 0.15 (p < 0.01)
2Glutathoine peroxidise36.16 ± 9.9029.71 ± 13.92 (p < 0.05)
3Glutathione reductase13.32 ± 3.5510.49 ± 2.11 (p < 0.001)

3.1.1.1. Protéines du cristallin solubles totales

La teneur totale en protéines du cristallin soluble dans le groupe 2 («contrôle toxique») (lentilles de cataracte induite par le dextrose) a diminué de 25,8% par rapport aux lentilles du groupe 1 (contrôle normal). La diminution était statistiquement très significative (p <0,0001).

3.1.1.2. Malondialdéhyde

La peroxydation lipidique mesurée en termes de taux de malondialdéhyde (MDA) a montré une augmentation des taux de MDA de 28,9% dans le groupe 2 («contrôle toxique») (lentilles de cataracte induites par le dextrose) par rapport au groupe 1 (lentilles de contrôle normales). L’augmentation de la MDA était statistiquement très significative (p <0,0001).

3.1.2. Expression du stress oxydatif

3.1.2.1. Superoxyde dismutase

Le groupe 2 (lentilles de cataracte induites par le dextrose) a montré une diminution de l’activité spécifique de l’enzyme superoxyde dismutase de 26,8% par rapport au groupe 1 (lentilles de contrôle normales) (tableau 2). La diminution était statistiquement significative (p <0,01).

3.1.2.2. Glutathion peroxydase

L’activité spécifique de la glutathion peroxydase a été réduite de 17,7% dans le groupe 2 (lentilles de cataracte induites par le dextrose) par rapport au groupe 1 (lentilles de contrôle normales). La diminution était statistiquement significative (p <0,05).

3.1.2.3. Glutathion réductase

Une diminution de 21,2% de l’activité spécifique de la glutathion réductase a été notée dans le groupe 2 (lentilles de cataracte induites par le dextrose) par rapport aux lentilles de contrôle avec une signification de p <0,001.

3.1.3. Morphologie du cristallin (groupe de comparaison 1 et groupe 2)

Le groupe 1 (lentilles de «contrôle normal») avait la transparence et la clarté maintenues comme en témoignent les grilles clairement visibles. Par rapport aux lentilles du groupe 1 («contrôle normal»), les lentilles du groupe 2 («contrôle toxique») ont montré une perte totale de transparence avec le développement d’une cataracte mature proche de la rupture comme en témoigne l’invisibilité des grilles, montrant ainsi un grade 4 changements (Fig.1).

Fig. 1

Fig. 1. A- Lentille de chèvre de contrôle normal (Grilles visibles) – Grade 0. B- Lentilles traitées au dextrose (Groupe 2) – Changements de Grade 4.

3.2. Effet de l’extrait aqueux de graines de S. cumini et de l’extrait aqueux de feuilles d’A. Marmelos sur les lentilles de cataracte induites par le dextrose

3.2.1. Expression de la peroxydation lipidique

3.2.1.1. Protéines du cristallin solubles totales

La teneur totale en protéines du cristallin soluble dans le groupe 3 (S.Cumini) a augmenté de 31,4% (p <0,01) (tableau 3) tandis que celle du groupe 4 (A. marmelos) a augmenté de 13,3% (non significatif) par rapport au groupe 2 (contrôle toxique).

Tableau 3. Effet des extraits aqueux de plantes médicinales sur la peroxydation lipidique et les enzymes antioxydantes.

NoParameterGroup 2 (n = 30) (“Toxic control”)
(cataract lenses)
Group 3 (n = 30)
(S. cumini seed extract treated lenses)
Group 4 (n = 30)
(A. marmelos leaf extract lenses)
1Total soluble lens proteins (mg/dL)
(Mean ± SD)
255 ± 62.4 (p < 0.0001)335.3 ± 74.03
Increase by 31.4% p < 0.01
294.33 ± 34.9
Increased by 13.3%
Not significant
2Malondialdehyde (MDA) (nmoles/ml)
(Mean ± SD)
13.45 ± 3.0 (p < 0.0001)9.48 ± 2.4
Decreased by 30.2% p < 0.001
10.34 ± 3.2
Decreased by 13.3%
Not significant
1Superoxide dismutase (units/mg lens)
(Mean ± SD)
0.30 ± 0.151.01 ± 0.28
Increased by 69.3%
P < 0.01
0.37 ± 0.12
Increased by 16.1%
Not significant
2Glutathione peroxidase (units/mg lens)
(Mean ± SD)
29.71 ± 13.9245.14 ± 14.2
Increased by 51.8%
P < 0.001
49.07 ± 22.4
Increased by 39.43% p < 0.01
3Glutathione reductase (units/mg lens) (Mean ± SD)10.49 ± 2.1131.33 ± 6.7
Increased by 66.4% p < 0.001
23.06 ± 6.8
Increased by 54.46% p < 0.001

3.2.1.2. Malondialdéhyde

La peroxydation lipidique mesurée en termes de taux de malondialdéhyde (MDA) a montré une diminution significative des taux de MDA de 30,2% (p <0,001) dans le groupe 3 (S. cumini), alors que dans le groupe A. marmelos, la diminution des taux de MDA était de 13,3 %, ce qui n’était pas significatif.

3.2.2. Expression du stress oxydatif

3.2.2.1. Superoxyde dismutase

Par rapport au groupe 2 (lentilles de cataracte), le groupe 3 (S.cumini) a montré une augmentation significative de l’activité spécifique de l’enzyme superoxyde dismutase de 69,3% (P <0,01), alors que dans le groupe 4 (A. marmelos), le l’augmentation était de 16,1%, ce qui n’était pas statistiquement significatif (tableau 3).

3.2.2.2. Glutathion peroxydase

Par rapport au groupe 2 (lentilles de cataracte), l’activité spécifique de la glutathion peroxydase a été augmentée de manière significative à la fois dans le groupe 3 (S.cumini) et le groupe 4 (A. marmelos). Chez S. cumini, il a augmenté de 51,8% (p <0,001), alors que chez A. marmelos, il a augmenté de 39,43% (p <0,01).

3.2.2.3. Glutathion réductase

De même, une augmentation statistiquement significative de l’activité spécifique de la glutathion réductase de 66,4% (p <0,001) a été enregistrée avec le groupe S.cumini (groupe 3), et l’augmentation était de 54,46% (p <0,001) avec le groupe A. marmelos ( Groupe 4) par rapport au groupe 2 (lentilles de cataracte).

3.2.3. Morphologie des verres

Par rapport aux lentilles de cataracte, les lentilles traitées avec de l’extrait de graines de S. cumini (groupe 3) et de l’extrait de A. marmelos (groupe 4) ont montré de légers changements de grade 1 avec des lignes de grille visibles et un maintien du contour et de la forme de la lentille, avec un gonflement minimal du cristallin. (Fig. 2).

Fig. 2

Fig. 2. A- Effet de l’extrait de graines de S. cumini (changements de grade 1). B- Effet de l’extrait de feuille d’A. Marmelos (changements de grade 2).

4. Discussion

S. cumini (Jamun) et A. marmelos ont été mentionnés dans la littérature ayurvédique pour leurs propriétés antidiabétiques. Cependant, il était nécessaire d’évaluer l’effet in vitro de ces extraits de plantes sur la morphologie du cristallin et sur les changements biochimiques liés au stress oxydatif qui se produisent dans la cataracte. Des rats diabétiques induits par la streptozotocine et des rats galoctosémiques ont été utilisés comme modèles animaux de cataracte diabétique et des souris ont été utilisées pour des études in vivo [18]. La présente étude a été réalisée en développant un modèle de cataracte in vitro dans des lentilles de chèvre en utilisant une concentration de dextrose plus élevée que celle utilisée dans les études antérieures connues [17]. La technique de culture d’organes du cristallin a été utilisée en utilisant un milieu de culture tissulaire (TC 199) et le dextrose a été utilisé comme toxique pour l’induction de la cataracte expérimentale à une concentration aussi élevée que 110 mM de dextrose, basé sur le modèle hyperglycémique pour la rétine de poisson développé par Alvarez et Al. [13].

Le but du présent travail était d’évaluer spécifiquement les effets locaux des extraits de graines de S. cumini et de feuilles d’A. Marmelos pour les propriétés antioxydantes et anticataractes testées par des paramètres biochimiques et physiques.

Le stress oxydatif est connu pour participer au développement du diabète et de ses complications comme la cataracte. Lors d’une exposition au dextrose à une concentration élevée, le glucose dans le cristallin commence à être utilisé par la voie du sorbitol. L’accumulation de polyols (alcools de sucre) provoque une surhydratation et un stress oxydatif conduisant à la génération de cataracte [13]. L’hyperglycémie induit un stress oxydatif par diverses voies [19]. Une oxydation supplémentaire des cristallines du cristallin ainsi que des protéines membranaires conduit à la formation d’agrégats de protéines insolubles. Perte de protéines solubles du cristallin par leur conversion en protéines insolubles en raison de l’oxydation des protéines du cristallin se traduisant par une diminution de la teneur totale en protéines du cristallin, comme en témoigne la présente étude.

La peroxydation lipidique a été évaluée par la teneur totale en protéines du cristallin soluble et les niveaux de malondialdéhyde. Le stress oxydatif a été évalué par la mesure des trois enzymes antioxydantes à savoir la superoxyde dismutase, la glutathion peroxydase et la glutathion réductase [19].

Un stress oxydatif accru altère les défenses enzymatiques contre les espèces réactives de l’oxygène. Ceci est mis en évidence par la diminution significative de diverses enzymes antioxydantes dans des modèles expérimentaux de cataracte dans les lentilles. Les antioxydants phytochimiques tels que les flavonoïdes, les tannoïdes, l’acide gallique et les phénols peuvent éliminer les radicaux libres. Les graines de S. cumini et les feuilles d’A. Marmelos sont riches en ces composés phytochimiques [9]. L’addition d’extrait aqueux de graines de S. cumini a montré une activité antioxydante significative, évidente par l’augmentation des niveaux des trois enzymes antioxydantes. L’extrait aqueux de feuilles d’A. Marmelos a présenté une activité antioxydante significative concernant les enzymes glutathion peroxydase et glutathion réductase. Ceci est provoqué par la désactivation des radicaux libres. La richesse en antioxydants phytochimiques dans les extraits de ces deux plantes oriente vers leur rôle probable dans la prévention de la peroxydation lipidique et donc de la formation de la cataracte. L’activité de piégeage des radicaux libres de l’extrait aqueux de S. cumini est évidente dans la présente étude par l’augmentation marquée des activités des enzymes antioxydantes du cristallin. L’extrait aqueux de feuilles d’A. Marmelos est également connu pour augmenter les niveaux de glutathion cellulaire [20]. Une augmentation significative de l’activité de la glutathion peroxydase et de la glutathion réductase dans les lentilles traitées avec l’extrait aqueux de feuilles d’A. Marmelos dans la présente étude peut être ainsi expliquée.

La morphologie de la lentille de chèvre a été étudiée en fonction de divers paramètres tels que la forme, le contour, le gonflement et la transparence des lentilles; et les modifications de la cataracte ont été classées selon leur gravité. Il a été constaté que l’exposition au dextrose 110 mM produisait des changements de grade 4 dans les lentilles de chèvre. Il y avait une perte totale de transparence avec gonflement osmotique et développement d’une cataracte mature proche de la rupture. Cela était évident par l’invisibilité des grilles. La gradation de la gravité de la cataracte a été utile pour comparer les effets des deux extraits de plantes.

Les deux extraits aqueux ont démontré une augmentation de l’activité spécifique des trois enzymes antioxydantes et une diminution significative des niveaux de malondialdéhyde ainsi qu’une préservation significative des niveaux de protéines solubles totales. Les deux extraits ont pu démontrer la préservation de la morphologie du cristallin contre les modifications de la cataracte. Cependant, l’extrait aqueux de graines de S. cumini a démontré un effet constamment meilleur que l’extrait aqueux de feuilles d’A. Marmelos en ce qui concerne tous les paramètres, y compris la préservation de la morphologie du cristallin. Les effets trouvés dans la présente étude renforcent les résultats du passé liés à S. cumini [9,10,21].

Les preuves expérimentales dans le passé ont démontré l’implication de la peroxydation lipidique dans la pathogenèse de la cataracte. Le malondialdéhyde (MDA) est connu comme un produit de dégradation prédominant des peroxydes lipidiques. Dans la cataracte humaine classique ainsi que cataracte nucléaire, la MDA a été augmentée respectivement de 3,5 fois et 2,5 fois par rapport aux niveaux normaux dans diverses études, et est identifiée comme une substance réactive à l’acide 2-thiobarbiturique (TBARS) [22,23]. L’augmentation des niveaux de MDA dans le modèle expérimental de la cataracte développé dans la présente étude a imité ces effets observés chez l’homme. Un mécanisme de défense altéré contre les métabolites réactifs de l’oxygène a été mis en évidence dans les lentilles cataractes humaines, tel qu’exprimé par une diminution significative des activités de diverses enzymes antioxydantes [22]. Le modèle expérimental développé dans la présente étude a imité ces effets, comme en témoigne la diminution des trois enzymes antioxydantes.

5. Limites de l’étude

Il existe en outre un besoin d’évaluer l’activité antioxydante de ces extraits de plantes dans un modèle de cataracte différent. Des études de puissance des deux extraits doivent également être effectuées pour explorer les étapes futures possibles des études in vivo.

6. Conclusion

Dans des lentilles de chèvre isolées présentant une cataracte diabétique induite par le dextrose, l’extrait de graines de S. cumini a montré des propriétés antioxydantes et anticataractes significatives. L’extrait de feuille d’A. Marmelos a également montré des propriétés anticataractes et antioxydantes significatives sur tous les paramètres testés à l’exception de l’enzyme superoxyde dismutase pour laquelle les effets étaient comparativement moindres

Remerciements

Les auteurs remercient le Département de biochimie, Bharati Vidyapeeth Deemed University Medical College Pune, d’avoir fourni leur infrastructure et leur équipement pour l’étude.

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    Peer review under responsibility of Transdisciplinary University, Bangalore.

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